一种新的气相色谱 – 质谱法的发展(GC-MS)方法对5α还原酶活性评估

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摘要

雄激素睾酮(T)和二氢睾酮(DHT)发挥的作用和前列腺组织的完整性的关键作用,而且还牵连……

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一种新的气相色谱 - 质谱法的发展(GC-MS)方法对5α还原酶活性评估

摘要

雄激素睾酮(T)和二氢睾酮(DHT)的前列腺组织的功能和完整性方面发挥关键作用但也牵连在前列腺癌和良性前列腺增生(BPH)。雄激素水平的降低可以通过3-氧代5α类固醇-4-脱氢酶(5α还原酶),这是负责不可逆转换的T为更具活性代谢物DHT的抑制来实现。事实上,使用的5α还原酶抑制剂(RIS),如非那雄胺,可以是用于治疗BPH和前列腺肿瘤的化学预防一种有价值的策略。在这项工作中基于一个分散液液微萃取(DLLME)过程的新方法,随后用气相色谱 - 质谱(GC-MS),以评价的5α还原酶活性,通过测量T的转化百分率为DHT进行了优化和验证。酶测定法在人前列腺微粒进行,使用T作为衬底。 T和DHT是由发达DLLME技术提取和定量,甲硅烷基化后,通过GC-MS。影响T和DHT的提取效率和衍生化的变量进行了评价。优化的方法表现出良好的线性关系(相关系数超过0.9994 T和0.9995为DHT),良好的回收率(高于80%),以及良好的帧内译码和帧间天精度(低于13%,3级, n的 = 6)。对于T和DHT的检出限分别为0.5nM和定量限为5纳米。新的GC-MS法是一种很好的替代已经描述的方法,来评价5α-还原酶活性,因为它避免了使用放射性化合物和对应的到快速和灵敏的方法以良好的提取效率,精度和高回收率。由于这种方法允许5α还原酶活性的评价中,也允许新分子作为潜在的RI的抑制功效的研究。

亮点

►这项工作提出了一个新的DLLME-GC / MS方法来量化T和DHT。 ►这种方法评估人类前列腺微粒的5α还原酶活性。 ►出示良好的线性关系,良好的提取效率,高精度和高回收率。 ►避免使用放射性化合物和需要酶反应样品量少。 ►该方法可用于研究的新的潜在的RI的生化活性。

缩写

TtestosteroneDHTdihydrotestosteroneBPHbenign前列腺hyperplasia5α-R5α-reductaseARandrogenreceptorRIs5α还原酶inhibitorsDLLMEdispersive液 - 液microextractionGC-MSgas色谱 - 质谱spectrometryTLCthin层chromatographyHPLChigh高效液相chromatographyLC / APCI-MSliquid色谱/大气压化学电离质谱spectrometryLC / ESI-MSliquid色谱/电喷雾电离质谱spectrometrySIMselected离子monitoringDTTdithiothreitolDMSOdimethyl sulfoxideNADPHmembrane结合烟酰胺dinucleotideMeCNacetonitrileMeOHmetanolC2H3Cl31,1,1-trichloroethaneC2HCl3trichloroethyleneC6H5ClchlorobenzeneC2Cl4tetrachloroethyleneMSTFAN甲基-N-(三甲基硅烷基)trifluoroacetamideBSTFAN,O-双(三甲硅烷基)trifluoroacetamideHFBAheptafluorobutyric anhydrideNH4IAmmonium iodideDTE1,4-dithioerythritolEIelectron电离

关键词

TestosteroneDihydrotestosteroneProstate5α-Reductase5α还原酶抑制剂(RIS)分散液液微萃取(DLLME)气相色谱 - 质谱(GC-MS)1

克里斯蒂娜阿马拉尔和SaraÇ 。库尼亚同等贡献的工作

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